反相液相色譜法測(cè)定硝基酚類物質(zhì)

[目的要求]

1、了解反相離子對(duì)色譜法分離離子型化合物的基本原理及操作條件。

2、掌握內(nèi)標(biāo)法色譜定量分析方法。

[基本原理]

反相離子對(duì)色譜是用疏水的固定相和含有低濃度反離子的極性緩沖液作流動(dòng)相進(jìn)行色譜分離的一種方法。它可以用于離子型或可解離化合物的分離，有代替離子交換色譜的趨勢(shì)，成為液相色譜的一個(gè)很有生氣的組成部分。容易被接受的機(jī)制是認(rèn)為解離的溶質(zhì)與流動(dòng)相中的反粒子形成疏水性離子對(duì)，然后按反相色譜的規(guī)律進(jìn)行分離。反離子的大小及濃度、有機(jī)改良劑的濃度和pH值均是控制分離的重要因素。

硝基酚類是可解離的有機(jī)酸，分離時(shí)采用四丁基銨離子作為反離子，在弱堿性條件下，硝基酚類按pKa值減小的順序流出。

內(nèi)標(biāo)法是廣泛使用的色譜定量方法。在進(jìn)行色譜定量之前，要選擇合適的內(nèi)標(biāo)物，并準(zhǔn)確測(cè)定校對(duì)因子。硝基酚類的測(cè)定采用2，4—二氯苯酚做內(nèi)標(biāo)物。測(cè)定校對(duì)因子fi時(shí)，將一定量組分i的標(biāo)準(zhǔn)品，與一定量的內(nèi)標(biāo)物混合，進(jìn)行色譜分離，測(cè)得的峰面積分別為Ai和As，W代表重量。

進(jìn)行定量分析時(shí)，將需一定量的內(nèi)標(biāo)物S加入欲測(cè)的樣品中，進(jìn)行色譜分離，測(cè)得的峰面積分別為Ai′和As′ 則：

W’i 、W’  s′分別為欲測(cè)的樣品中組分i的量和內(nèi)標(biāo)物S的量

[實(shí)驗(yàn)條件]：

固定相：YWG—C18；流動(dòng)相：甲醇/水 55:45，含20 mmol/L四丁基溴化銨，并用KH2PO4/K2HPO4調(diào)整pH值在7.5—8.5之間。流量：1 mL/min；檢測(cè)：紫外—254 nm，0.02 AUFS；溫度：室溫；紙速：5 mm/min

標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試：對(duì)硝基苯酚；2，4—二硝基苯酚；2，5—二硝基苯酚2，6—二硝基苯酚；2，4，6；內(nèi)標(biāo)物：2，4—二氯苯酚

[操作步驟]

1、標(biāo)準(zhǔn)品溶液及內(nèi)標(biāo)物溶液的配制

（1）準(zhǔn)確稱取鄰硝基苯酚10 mg，對(duì)硝基苯酚16 mg，2，4—二硝基苯酚10 mg，2，5—二硝基苯酚6 mg，2，6—二硝基苯酚10 mg，2，4，620 mg。溶解于50 mL甲醇，轉(zhuǎn)入100 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度搖勻。

（2）準(zhǔn)確稱取2，4—二氯苯酚0.3克，配成100 mL甲醇/水溶液。

2、測(cè)定校對(duì)因子Fi

將1 mL內(nèi)標(biāo)物溶液與1 mL標(biāo)物溶液混合。待儀器穩(wěn)定后，注入10 μL混合液，記錄色譜圖1

1、 樣品的測(cè)定

將欲分析的樣品與內(nèi)標(biāo)物溶液混合。注入10 μL，記錄色譜圖2。根據(jù)保留數(shù)值，確定試樣中含有哪些成分。

[數(shù)據(jù)處理]

1、測(cè)量色譜圖1和圖2中各峰的面積。

2、根據(jù)色譜圖1的數(shù)據(jù)，計(jì)算各組分的相對(duì)校正因子。

3、根據(jù)色譜圖2的數(shù)據(jù)，計(jì)算試樣中各組分的含量，g/mL